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灵芝发酵液多糖测定方法？大家是如何测定多糖的

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季宇彬.《多糖的化学与药理》.北京:人民卫生出版社.2005.5多糖含量测定（1）显色试剂硫酸法：根据单糖、多糖及其衍生物在硫酸作用下水解、脱水生成糖醛类化合物，与酚类、芳胺类等缩合成有色化合物。

苯酚硫酸法生成橙黄色溶液，在490nm处有特征吸收；蒽酮硫酸法生成亮绿色溶液，在630nm处有特征吸收；咔哇硫酸法用于测定糠醛酸（伯醇基氧化：形成糠醛酸，斐林（Fehling）试剂可定量。

苯酚-硫酸试剂可与游离的寡糖、多糖中的己糖、糠醛酸起显色反应，己糖在490nm处（戊糖及糠醛酸在480nm处）有大吸收，吸收值与糖含量呈线性关系）。

显色试剂硫酸法方便简单，但需严格控制水解条件。

（2）DNS法：一个能消除还原性杂质干扰的方法（在氢氧化钠和丙三醇的存在下，还原糖能使DNS还原生成3-氨基-5-硝基水杨酸，在沸水浴中显色2~5min，此化合物在过量的氢氧化钠碱性溶液中呈橘红色，波长在540nm下有大吸收峰，并且吸光度与还原糖含量有线性关系。

试验过程中诸多因素如吸收光谱、显色剂用量、显色时间等均对测定结果有直接影响）。

利用3,5-二硝基水杨酸与多糖水解产物还原糖共热后还原成棕红色氨基化合物，于540nm处有特征吸收。

（主要参考文献：董文慧,等.云芝泰中云芝多糖的工业分析方法.中成药,1990,12(2):33.齐香君,等.3,5-二硝基水杨酸比色法测定溶液中还原糖的研究.纤维素科学与技术.2004,12(3):17~19）（3）滴定法：有斐林氏滴定法，间接碘量滴定法。

（4）气相色谱法：可定性、定量分析多糖的组分及含量，常采用衍生物法以增加其挥发性。

一般是将多糖酸水解物或甲醇解（用盐酸-甲醇）物，用三甲基硅烷基化（TMS）或三氟乙酰化（TFA）转化为硅烷化产物或二酰化产物进行气相色谱分析。

但乙酰化之前，糖先用KBO4或NaBH4作还原成开链的糖醇化合物较好。

多糖用甲醇解方式把半缩醛甲基化，形成甲基糖苷后再TMS化，异构物减少，有利于分辨。

常以甘露醇或肌醇为内标，用已知的各种单糖作标准。

（5）高效液相色谱法：选用TSK、SW凝胶排斥色谱柱为分离柱，样品经简单预处理，在示差折光检测器中进行检测，以不同分子量的标准右旋糖酐作标准，同时测定样品中多糖的分子量分布情况及其含量。

灵芝发酵液多糖测定方法？大家是如何测定多糖的

换算因子F的测定参见附件还阳参多糖的定性分析及含量测定.pdf|||常见的方法有：GPC测定多糖分子量及其分布琼脂糖电泳法HPLC方法测定多糖。

不同的方法会有些差异。

Molisch反应（α-萘酚反应）此方法是鉴定糖类常用的颜色反应。它的原理是：糖类在浓酸作用下所形成的糠醛及其衍生物可以与α-萘酚作用，形成红紫色复合物。由于在糖溶液与浓硫酸两液面间出现红紫色的环，因此又称紫环反应。

α-萘酚也可用麝香草酚或其他的苯酚化合物代替，麝香草酚溶液比较稳定，其灵敏度与α-萘酚一样。

除了糖类之外，各种糠醛衍生物、葡萄糖醛酸、丙酮、甲酸、乳酸等都可以呈现近似的阳性反应。

因此，阴性反应证明没有糖类物质的存在；而阳性反应只能说明有糖类存在的可能。

此反应不能鉴别多聚糖如淀粉，纤维素等。

灵芝菌包的发酵时间取决于多种因素，如菌包的大小、氧气浓度、温度、pH值和灵芝种类等。通常情况下，灵芝菌包的发酵时间应该在10-30天之间。在发酵过程中，氧气含量的增加可以促进灵芝菌丝的生长和灵芝多糖的生成。因此，适当的氧气供应可以促进灵芝菌包的发酵过程。

另外，温度也是影响灵芝菌包发酵时间的重要因素，一般来说，发酵温度应该在25-30摄氏度之间，这有利于提高灵芝菌包的生产效率。在选择灵芝菌包发酵方法时，应该根据实际情况进行选择。

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